Penelitian ini bertujuan mengembangkan biochemical sensor berbasis medan evanescent pada plastic optical fiber (POF) untuk deteksi asam laktat dengan metode resin–polish dan etching aseton. Larutan asam laktat dengan konsentrasi 1%–5% dikarakterisasi menggunakan refraktometer, UV-Vis Perkinelmer Lambda 365, UV-Vis Ocean Optics, dan sensor fiber optik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi asam laktat menyebabkan kenaikan indeks bias dan absorbansi. Parameter optimum metode resin–polish diperoleh pada panjang sensing 2 cm dan kedalaman polishing 0,10 mm, sedangkan metode etching optimum pada waktu etching 30 menit. Metode resin–polish menunjukkan performa lebih baik dengan slope 0,05058, LOD 1,30%, dan LOQ 3,95%, dibandingkan metode etching aseton dengan slope 0,02528, LOD 2,61%, dan LOQ 7,91%. Selain itu, metode resin–polish menunjukkan repeatability yang lebih baik dengan nilai RSD rata-rata 1,07%, dibandingkan metode etching aseton sebesar 5,44%. Hasil ini menunjukkan bahwa metode resin–polish lebih berpotensi untuk dikembangkan sebagai biosensor berbasis fiber optik untuk deteksi asam laktat.