Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan c.335 A>T gen IGF-1 pada sapi Friesian Holstein (FH) dengan analisis PCR-RFLP. Tahap pertama penelitian adalah mengambil 96 sampel darah sapi FH di PT. Ultra Peternakan Bandung Selatan. Ekstraksi DNA, amplifikasi DNA dan genotyping dilakukan di UPT Laboratorium Terpadu Sub Laboratorium Biologi, Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Amplifikasi DNA dan genotyping menggunakan metode Polymerase Chain Reaction – Restriction Fragment Lenght Polymorphism (PCR-RFLP). Amplifikasi DNA dengan primer forward 5’- CCCTGGAGTTGGTAGATTGC-‘3 dan primer reverse 5’- CAGCCTGTGTTGCGTAGAAA-‘3 didapatkan sehingga menghasilkan visualisasi panjang produk yaitu 234 bp. Produk PCR kemudian didigesti dengan enzim restriksi ApoI. Hasil menunjukkan bahwa 2 genotip dari c.335 A>T teridentifikasi, yaitu AT danTT. Heterozigot AT menunjukkan pita 234 bp, 104 bp, dan 130 bp. Homozigot TT menunjukkan panjang pita 104 bp dan 130 bp atau terpotong sempurna. Frekuensi dari genotip AA, AT dan TT masing-masing adalah 0; 0,34 dan 0,36. Pada penelitian ini tidak ditemukan genotip AA. Analisis Hardy-Weinberg dengan menggunakan uji Chi-square menunjukkan tidak berada dalam kesetimbangan P<0>T gen IGF-1 adalah polimorfik. Penelitian lebih lanjut mungkin dilakukan untuk menilai polimorfisme dengan sifat kuantitatif pada sapi FH.