Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan kualitas mikroskopis spermatozoa pada semen beku sapi pejantan peranakan ongole (PO) pada umur 6 dan 8 tahun. Penelitian menggunakan 6 sampel straw semen beku masing-masing 3 sampel tiap kelompok umur. Parameter kualitas mikroskopis yang diamati meliputi motilitas individu, viabilitas, keutuhan membran plasma, dan abnormalitas spermatozoa. Hasil pengamatan diuji signifikansinya mengguna uji T dengan ɑ: 5%. Rataan parameter motilitas, viabilitas, keutuhan membran plasma, dan abnormalitas primer, serta sekunder umur 6 tahun berturut-turut adalah 83,33±2,22 ; 63,67±3,89 ; 55,00±16,67 ; 2,17±2,56 ; 8,83±3,11 ; dan umur 8 tahun berturut-turut adalah 83,33±2,22 ; 56,83±2,56 ; 31,50±6,00 ; 2,50±1,00 ; 10,50±1,67. Pada seluruh parameter dilakukan uji T antar umur yang hasilnya tidak berbeda nyata (P>0,05). Semen beku sapi pejantan peranakan ongole (PO) umur 6 dan 8 tahun keduanya memiliki performa yang sebanding pada pelaksanaan IB.