Latar belakang kejadian kematian ibu di Indonesia 75% disebabkan karena komplikasi persalinan yang tidak segera mendapat penanganan yang baik dan tepat waktu. Keterlambatan tersebut terjadi karena ibu hamil dan keluarga masih belum memahami hal-hal yang perlu dipersiapkan dalam menghadapi persalinan. Oleh karena itu, prenatal education sangat penting untuk diberikan agar meningkatkan pemahaman ibu hamil dan keluarga terkait kesiapan dalam menghadapi persalinan. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh prenatal education terhadap kesiapan persalinan ibu hamil trimester III di wilayah kerja Puskesmas Gondangrejo Karanganyar. Metode penelitian ini menggunakan desain penelitian quasi-experiment design dengan rancangan Pre-test post-test control group design. Penelitian ini melibatkan dua kelompok yang mana kelompok intervensi diberikan prenatal education sebelum post-test dan kelompok kontrol tetap diberikan intervensi, tetapi setelah post-test sebagai asas keadilan responden. Sampel yang didapatkan sebesar 74 orang dengan jumlah masing-masing kelompok 37 orang. Teknik pengambilan sampel dalam penelitian ini menggunakan purposive sampling. Analisis data yang digunakan adalah uji Wilcoxon Signed Rank, uji Mann-Whitney, dan uji Regresi Logistik Berganda. Hasil uji Wilcoxon Signed Rank pada kelompok intervensi didapat nilai z -2.132 (p = 0,033) sehingga Ha diterima, dan nilai z -816 (p = 0,414) pada kelompok kontrol sehingga Ha ditolak, yang berarti terdapat perbedaan yang bermakna antara kesiapan persalinan ibu hamil trimester III sebelum dan setelah diberikan prenatal education pada kelompok intervensi, sedangkan pada kelompok kontrol tidak terdapat perbedaan yang bermakna. Hasil uji Mann-Whitney didapat nilai z -7.254 (p = 0,000) sehingga Ha diterima. Kesimpulan ibu hamil trimester III yang mendapat prenatal education, memiliki kesiapan persalinan yang lebih baik, jika dibandingkan dengan ibu hamil trimester III yang tidak mendapat prenatal education. semakin sering ibu mendapat prenatal education, maka semakin meningkatkan kesiapan persalinan ibu hamil trimester III sebesar 3 kali lipat dengan peluang maksimal 8 kali lipat. Dari hasil penelitian ini, disarankan bagi peneliti selanjutnya diharapkan dapat memberikan prenatal education lebih sering atau minimal 2 minggu sekali, dan mengembangkan materi prenatal education yang diberikan seperti kepatuhan ibu dalam melaksanakan ANC dan pemberian asuhan komplementer.