Daun mimba (Azadirachta indica A. Juss) dapat berfungsi sebagai antifeedant dan repellent dalam penggunaannya sebagai pestisida alami. Penggunaan insektisida daun mimba dalam jangka panjang dapat menimbulkan efek negatif terhadap tanaman yang terpapar. Uji genotoksisitas menggunakan Allium cepa Assay perlu dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya senyawa yang bersifat genotoksik. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui dan mengkaji sifat genotoksisitas variasi ekstrak daun mimba terhadap kromosom.Daun mimba dimaserasi lalu diuapkan hingga diperoleh ekstrak kentalnya. Allium cepa Assay disiapkan kemudian diberi perlakuan variasi konsentrasi ekstrak etanol daun mimba, serta digunakan kontrol positif berupa ethylmethane sulphonate (EMS) dan kontrol negatif berupa aquades. Akar bawang disquash dan dihitung indeks mitosis serta abnormalitas kromosom. Ekstrak etanol daun mimba terbukti memiliki sifat genotoksik dan memberikan pengaruh secara nyata terhadap indeks mitosis dan aberasi kromosom. Aberasi kromosom terlihat pada sampel uji disertai dengan penurunan indeks mitosis dan kenaikan nilai abnormalitas sel.