Telah dilakukan isolasi serta uji aktivitas antibakteri minyak atsiri umbi teki (Cyperus rotundus L. ) dari daerah Kartasura Sukoharjo terhadap Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus. Salah satu manfaat umbi teki adalah sebagai obat anti diare. S. typhi dan S. aureus merupakan bakteri yang dapat menimbulkan diare malalui kontaminasi makanan, maka perlu diuji kepekaan bakteri tersebut terhadap minyak atsiri umbi teki. Minyak atsiri diperoleh dengan metode destilasi stahl dengan warna kuning jernih dan kadar 0,33% (v/b). Identifikasi komponen kimia minyak atsiri dilakukan dengan analisis data GC-MS yang menunjukkan terdapat 63 komponen yang terdeteksi dalam minyak atsiri umbi teki dengan beberapa komponen utamanya antara lain kopaena (4,27%), naftalena (5,85%), kariofilena oksida (13,13%) dan humulena oksida (14%). Uji aktivitas antibakteri minyak atsiri dilakukan dengan metode difusi media agar menggunakan teknik sumuran, menunjukkan adanya penghambatan terhadap S. typhi dan S. aureus dengan diameter penghambatan berturut-turut sebesar 20 mm dan 11,3 mm. Dilakukan variasi konsentrasi minyak atsiri 75%, 50% dan 25% untuk memperkirakan nilai KHM. Diperoleh nilai KHM untuk S. typhi dan S. aureus berturut-turut sebesar 100% dan 50%. Kata kunci : Minyak atsiri, Cyperus rotundus L., isolasi, aktivitas antibakteri, S. aureus, S. typhi