Pembuatan biosurfaktan secara biotransformasi menggunakan limbah cair industri tapioka (manipueira) sebagai media oleh Pseudomonas fluorescens dengan variasi media fermentasi dan perlakuan awal telah dilakukan. Pengukuran kepadatan sel, indeks emulsi, dan tegangan muka diukur selama 12 hari. Recovery biosurfaktan dilakukan dengan pengasaman terhadap supernatan dilanjutkan dengan ekstraksi menggunakan pelarut kloroform- methanol (2:1). Identifikasi biosurfaktan meliputi identifikasi rhamnosa berdasarkan analisa data UV-Vis dan FT-IR. Karakterisasi biosurfaktan dilakukan dengan penentuan konsentrasi kritik misel (KKM) dan sistem emulsi. Uji aktifitas sebagai emulsi ditentukan dengan pengukuran tegangan antar muka, indeks emulsi, kestabilan emulsi, aktifitas emulsifikasi dan konstanta peruraian (Kd). Hasil penelitian menunjukkan bahwa kondisi optimum pembuatan biosurfaktan adalah dengan media manipueira dan penambahan nutrient broth tanpa sentrifugasi (NBM) dan lama fermentasi selama 2 hari. Biosurfaktan yang didapatkan disebut BioSfluorpueira. Analisa spektrofotometer UV-Vis dan FT-IR menunjukkan BioSfluorpueira mengandung rhamnosa dan mempunyai gugus hidroksi, ester, karboksilat, metil dan metilen seperti yang terdapat pada rhamnolipida. BioSfluorpueira mempunyai nilai KKM 715,097 mg/L dengan tegangan muka 0,0594 N/m. BioSfluorpueira terbukti mampu menurunkan tegangan muka dan membentuk emulsi dengan beberapa hidrokarbon, yaitu minyak sawit, minyak kedelai, minyak zaitun, minyak pelumas, minyak tanah, minyak diesel, parafin, n-pentana, n-heksana, benzena, benzaldehid, benzil klorida, anilin, anisaldehid dan toluen. BioSfluorpueira terbukti efektif dalam degradasi fenol sehingga dapat digunakan untuk bioremidiasi lingkungan.