Kratom (Mitragyna speciosa) merupakan tanaman yang secara tradisional digunakan untuk mengatasi berbagai kondisi, termasuk nyeri. Kandungan alkaloid mitraginin dalam daun kratom berperan dalam efek analgesik, tetapi penggunaannya juga dikaitkan dengan potensi toksisitas. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi toksisitas subkronik pemberian fraksi etil asetat daun kratom secara intravena pada tikus putih (Rattus norvegicus), dengan menilai indikator hematologi, histopatologi organ, serta efek analgesik terhadap nyeri yang diinduksi oleh asam asetat.Fraksi etil asetat diperoleh melalui ekstraksi menggunakan metode maserasi dengan metanol, kemudian difraksinasi menggunakan partisi cair-cair. Identifikasi fraksi dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan eluen n-heksana:etil asetat. Hewan uji dibagi menjadi lima kelompok: kontrol negatif (KN), kontrol positif (KP), dan tiga kelompok perlakuan dengan dosis fraksi etil asetat dari rentang 0,3125 mg/200 gBB hingga 1,25 mg/200 gBB. Parameter hematologi, histopatologi organ hepar dan ren, serta respon nyeri diamati untuk mengevaluasi efek toksisitas dan aktivitas analgesik.Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian fraksi etil asetat menyebabkan perubahan signifikan pada beberapa parameter hematologi, termasuk peningkatan jumlah WBC dari pada KN menjadi pada K3, serta penurunan RBC dan HGB yang mencerminkan efek toksik pada darah. Analisis histopatologi menunjukkan bahwa peningkatan dosis fraksi etil asetat berbanding lurus dengan tingkat kerusakan hepar dan ren, ditandai dengan nekrosis dan degenerasi sel yang lebih tinggi pada kelompok K2 dan K3. Di sisi lain, efek analgesik juga meningkat seiring peningkatan dosis, dengan persentase hambat nyeri tertinggi pada K3 dibandingkan dengan KP. Kesimpulannya, fraksi etil asetat daun kratom memiliki potensi sebagai agen analgesik, tetapi berisiko menyebabkan toksisitas organ jika digunakan dalam dosis tinggi.