Puskesmas X Wonosobo merupakan salah satu fasilitas pelayanan kesehatan yang menyediakan pelayanan rawat jalan serta rawat inap. Terdapat berbagai macam potensi yang menjadi awal mula sumber kebakaran seperti instalasi listrik, tabung gas bertekanan tinggi, dan benda yang mudah terbakar. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh pelatihan kebakaran terhadap pengetahuan dan kesiapsiagaan kebakaran pada karyawan Puskesmas X Wonosobo. Penelitian ini menggunakan metode penelitian kuantitatif dengan jenis penelitian quasi experimental dan menggunakan purposive sampling untuk pemilihan sampel penelitian. Hasil uji statistik dengan Wilcoxon didapatkan nilai p sebesar 0,000 pada pengetahuan dan kesiapsiagaan kebakaran kelompok eksperimen. Sedangkan dengan uji Mann-Whitney pada pengetahuan dan kesiapsiagaan kebakaran didapatkan nilai p sebesar 0,000 pada masing-masing uji statistik yang dilakukan. Dapat disimpulkan bahwa pelatihan kebakaran berpengaruh terhadap peningkatan pengetahuan dan kesiapsiagaan kebakaran yang dimiliki oleh responden.