Tujuan penelitian ini adalah untuk mengembangkan instrumen penilaian Two Tier Multiple Choice yang terintegrasi Virtual Reality (TTVR) bermuatan etnokimia dalam mendeteksi miskonsepsi peserta didik pada materi asam basa. Instrumen dikembangkan menggunakan model pengembangan ADDIE hingga tahap development, dengan mengangkat etnokimia “Jamasan Keris”. Validasi isi oleh ahli materi dan media menunjukkan bahwa instrumen yang terdiri dari 10 butir soal dan 16 indikator storyboard dinyatakan valid dengan indeks Aiken berkisar antara 0,90 hingga 1,00, melampaui batas minimal 0,76. Uji coba terbatas terhadap siswa SMA di Surakarta menunjukkan bahwa TTMVR mampu mengidentifikasi tingkat pemahaman dan miskonsepsi dengan hasil: 36% paham, 32% tidak paham, 16% mengalami miskonsepsi tipe 1 dan tipe 2. Penilaian pengguna menunjukkan respons positif dengan rata-rata skor angket sebesar 81%, masuk kategori “bagus”. Dengan demikian, TTMCVR bermuatan etnokimia dinilai layak digunakan sebagai instrumen diagnostik inovatif dalam pembelajaran kimia yang mampu mengungkap pemahaman konseptual peserta didik secara lebih akurat dan kontekstual.Hal ini memastikan bahwa instrumen tersebut dapat mengukur secara efektif apa yang ingin dinilai. Data validitas isi diperoleh dari tujuh orang pakar, termasuk dua dosen pendidikan kimia dari UNS dan lima guru SMA di Surakarta. Uji validitas isi menggunakan skala penilaian 1-4, dengan kategori yang ditetapkan sebagai berikut: relevan dengan skor 4; kurang relevan dengan skor 3; tidak relevan dengan skor 2; dan cukup relevan dengan skor 1. Skala ini diaplikasikan pada 15 pertanyaan instrumen dan 16 indikator storyboard yang terkait dengan aspek media dan materi. Hasil pengembangan instrumen asesmen TTVR untuk konten asam-basa mencapai indeks Aiken lebih dari 0,76, yang menunjukkan bahwa instrumen tersebut valid. Hal ini menunjukkan bahwa instrumen asesmen TTVR dan storyboard dianggap sesuai, dengan perbaikan yang dilakukan berdasarkan saran dan umpan balik dari para pakar.