Kitosan diketahui dapat meningkatkan sinyal pertumbuhan eksplan anggrek serta memiliki sifat antijamur dan antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh pelapisan kitosan pada permukaan luar biji sintetik dalam mengurangi resiko kontaminasi serta memicu pertumbuhan dan perkembangan protokorm anggrek bulan (Phalaenopsis amabilis (L.) Blume).
Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan, masing-masing kelompok perlakuan dengan 10 ulangan. Variasi konsentrasi kitosan yang digunakan adalah sebagai berikut : K0: 0 % Kitosan, K1: 0,5 % Kitosan, K2: 1 % Kitosan, K3: 1,5 % Kitosan, K4: 2 % Kitosan, K5: 2,5 % Kitosan. Biji sintetik dibentuk dengan melapisi protokorm menggunakan hidrogel kalsium-alginat-kitosan. Pengaruh kitosan diamati secara in vitro dan ex vitro. Data pengamatan secara ex vitro meliputi persentase kontaminasi, sedangkan data pengamatan secara in vitro meliputi persentase perkecambahan, waktu biji sintetik berkecambah, jumlah dan panjang akar, jumlah dan panjang daun. Data persentase kontaminasi, persentase perkecambahan, waktu biji sintetik berkecambah dan panjang akar dianalisis secara deskriptif, sedangkan data jumlah dan panjang daun serta jumlah akar dianalisis dengan Analysis of Variance (ANOVA), jika ada  perbedaan nyata di antara kelompok perlakuan dilanjutkan dengan uji DMRT taraf 5 %.
Pelapisan kitosan tidak berpengaruh terhadap perlindungan biji sintetik dari kontaminasi secara ex vitro. Perlakuan variasi konsentrasi kitosan mulai dari 0,5% hingga 2,5% memberikan pengaruh positif terhadap pembentukan kelengkapan organ meliputi tunas, daun, dan akar, sedangkan perlakuan tanpa kitosan tidak menghasilkan akar. Pelapisan kitosan tidak memberikan pengaruh yang signifikan pada variabel pertumbuhan meliputi jumlah dan panjang daun.
Kata kunci : Phalaenopsis amabilis (L.) Blume, kitosan, biji sintetik, pertumbuhan, perkembangan