Latar Belakang : Shift kerja adalah periode kerja yang dijadwalkan bekerjasecara bergiliran dalam waktu 24 jam. Shift kerja dapat menyebabkan kelelahankerja dan perubahan tekanan darah. Perubahan jadwal kegiatan dari pagi kemalam pada pekerja shift menyebabkan circandian ritme yang berakibatterganggunya berbagai fungsi tubuh, termasuk menimbulkan kelelahan kerja dantekanan darah pada shift pagi dan malam.Metode : Penelitian ini adalah penelitian survey analitik, dengan desain crosssectional. Teknik sampling yang digunakan adalah total sampling . Populasi 33perawat wanita shift di Bangsal III RSUD Dr. Moewardi Surakarta. Penelitian inimenggunakan reaction timer untuk mengukur tingkat kelelahan kerja dansphygnomomanometer untuk mengukur tekanan darah. Teknik analisis data yangdigunakan adalah uji statistik Mann-Whitney.Hasil : Berdasarkan uji Mann-Whitney diperoleh nilai statistik tingkat kelelahankerja dengan p = 0.000 yang menunjukkan terdapat perbedaan tekanan darah padashift pagi dan shift malam. Hasil statistik diperoleh nilai statistik tekanan darahsistolik dengan p = 0.000 yang menunjukkan ada perbedaan tekanan darahsistolik pada shift pagi dan shift malam. Sedangkan nilai statistik tekanan darahdiastolik dengan p = 0.122 yang menunjukkan tidak ada perbedaan tekanan darahdiastiolik pada shift pagi dan shift malam.Simpulan : Terdapat perbedaan tingkat kelelahan kerja dan tekanan darah sistolikpada perawat wanita shift pagi dan shift malam, sedangkan tidak ada perbedaantekanan darah diastolik pada shift pagi dan shift malam di RSUD Dr. Moewardi.Kata Kunci : Kelelahan Kerja, Tekanan Darah, Shift Kerja