Latar Belakang : Anemia pada remaja putri merupakan salah satu dampak masalah kekurangan zat gizi. Tingginya prevalensi anemia pada remaja di Indonesia disebabkan oleh kurangnya asupan gizi (zat besi, asam folat, protein, vitamin C, vitamin A, seng, dan vitamin B12), dan penghambat absosrpsi besi. Salah satu upaya pencegahan dan pengendalian anemia adalah dengan suplementasi besi dan folat. Pemberian zat gizi mikro seperti asam folat dapat meningkatkan kadar hemoglobin. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh suplementasi tablet besi dengan dan tanpa asam folat terhadap kadar hemoglobin pada remaja putri anemia Politeknik Kesehatan Tasikmalaya. Metode : Jenis penelitian ini adalah eksperimen kuasi, dengan rancangan pretest-posttest control group. Subjek penelitian adalah remaja putri anemia berusia 17-20 tahun di Politeknik Kesehatan Tasikmalaya. Subjek penelitian sebanyak 64 yang terdiri dari 32 subjek kontrol dan 32 subjek intervensi. Pengumpulan data dilakukan dengan pemeriksaan kadar hemoglobin. Sebelum suplementasi 2 kali per minggu selama 8 minggu terlebih dahulu diberikan obat cacing, selanjutnya dilakukan lagi pemeriksaan hemoglobin lalu di analisis dengan menggunakan uji multivariat untuk melihat perbedaan kadar hemoglobin antara kelompok kontrol dan kelompok intervensi. Hasil Penelitian : Rerata hemoglobin kelompok intervensi sebelum diberikan suplemen berbeda dengan rerata hemoglobin pada kelompok kontrol (11,66 g/dL dan 11,42 g/dL ; p = 0,026). Setelah diberikan suplemen besi di tambah asam folat ternyata lebih tinggi kenaikan hemoglobin sebesar 0,41 g/dL (b = 0,41 ; CI = 0,16 – 0,67 ; p = 0,002). Ada perbedaan bermakna kadar hemoglobin sesudah perlakuan dengan signifikan p = 0,019. Kesimpulan Penelitian : Penambahan asam folat pada suplementasi besi dapat meningkatkan kadar hemoglobin 0,41 g/dL daripada suplementasi besi saja. Pada remaja putri anemia diharapkan meningkatkan pengetahuan tentang pemilihan bahan makanan dengan membuat program dan kebijakan suplementasi tablet besi supaya tidak terjadi anemia yang lebih lanjut. Kata Kunci : Anemia, suplementasi besi, asam folat, kadar hemoglobin, remaja putri