Pendahuluan: Stres adalah gangguan yang banyak dialami dan tidak bisa dihindari serta berdampak buruk pada berbagai organ termasuk organ reproduksi. Pada testis, stres dapat meningkatkan ekspresi caspase-3 yang merujuk pada peningkatan angka apoptosis dan akhirnya menyebabkan infertilitas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol pegagan (Centella asiatica L. urban) terhadap  ekspresi Caspase-3 testis tikus (Rattus norvegicus) yang diinduksi stres imobilisasi kronik
Metode: Penelitian ini adalah observasional analitik. Subyek berupa organ testis tikus putih (Rattus norvegicus) galur Sprague Dawley yang telah diberikan perlakuan pemberian ekstrak etanol pegagan dengan berbagai dosis perlakuan dan stres imobilisasi selama 21 hari kemudian dibuat preparat blok parafin dengan pengecatan IHC caspase-3. Penelitian ini menggunakan rancangan simple random sampling dengan 6 kelompok yaitu: KK (kelompok tanpa perlakuan), KP1 (kelompok yang mendapat induksi stres), KP2 (induksi stres dan ekstrak 150 mg/kg), KP3 (induksi stres dan ekstrak 300 mg/kg), KP4 (induksi stres dan ekstrak 600 mg/kg) dan KP5 (induksi stres dan fluoksetin 10 mg). Pengamatan pada seluruh lapang pandang, dengan penilaian ekspresi  imunohistokimia caspase-3 dilakukan dengan skala area pengecatan (0-30%: +, 31-70%: ++,70-100%: +++). Analisis data menggunakan uji statistik Kruskal Wallis.
Hasil: Ekstrak etanol Pegagan secara signifikan (p = 0.001) menurunkan ekspresi caspase-3 testis tikus yang diinduksi stres imobilisasi kronik. Perlakuan induksi stres menunjukkan ekspresi caspase-3 yang signifikan (p = 0.0014). Penurunan ekspresi caspase-3 ekstrak etanol pegagan tidak tergantung dosis (p > 0,05) dan dapat diperbandingkan dengan efek penurunan fluoxetin sebagai kontrol positif (p > 0,05) .