Padi hitam (Oryza sativa L. Indica) merupakan tanaman pangan jenispadi yang memiliki pigmen warna hitam terdapat pada lapisan perikarp hinggalapisan luar endosperm beras. Beras hitam memiliki kandungan serat yangberfungsi untuk menekan risiko diabetes namun masih jarang dibudidayakankarena tanaman padi hitam yang memiliki batang tanaman lebih tinggi. Upayauntuk mendapatkan tanaman padi hitam yang memiliki varietas unggul adalahdengan menggunakan iradiasi sinar gamma. Penelitian ini bertujuan untukmengkaji karakter morfo-fisiologi, keragaan hasil, serta mengetahui kandunganserat padi hitam hasil iradiasi sinar gamma 300 gray generasi M3.Penelitian ini dilaksanakan di Desa Jati, Kecamatan Jaten, KabupatenKaranganyar dan Laboratorium Biokimia dan Kimia Pangan Fakultas PertanianUNS pada bulan April-Juli 2019. Metode penelitian yang digunakan adalahpercobaan lapang dengan menanam benih padi hitam varietas lokal asal Bantuldan Boyolali generasi M2 dengan perlakuan iradiasi dosis 300 gray dan tanpairadiasi. Penanaman dilakukan pada empat blok dimana setiap blok ditanam satuvarietas dan satu perlakuan iradiasi yaitu populasi tanaman padi hitam varietaslokal asal Bantul dan Boyolali dengan urutan blok (I) Bantul Kontrol; (II) Bantul300 gy; (III) Boyolali 300 gy; dan (IV) Boyolali Kontrol. Setiap tanaman memilikijarak tanam 20x25 cm. Variabel yang diamati meliputi Indeks Luas Daun, BobotDaun Khas, Laju Pertumbuhan Tanaman, Laju Asimilasi Bersih, Tinggi Tanaman,Jumlah Anakan Total dan Jumlah Anakan Produktif, Panjang Malai, IndeksKelebatan Malai, Jumlah Gabah Isi per Malai, Bobot Gabah per Rumpun, Bobot100 Biji, dan Kandungan Serat Kasar. Data yang diperoleh dianalisis secaradeskriptif dan dilanjutkan dengan uji T untuk melihat signifikasi data.Hasil Penelitian menunjukkan bahwa tanaman padi hitam hasil iradiasisinar gamma 300 gy generasi M3 varietas Bantul dan Boyolali memiliki nilaiBobot Daun Khas, Laju Pertumbuhan Tanaman, dan Laju Asimilasi Bersih lebihtinggi dibandingkan tanaman kontrol. Indeks Luas Daun tanaman hasil iradiasivarietas lokal asal Bantul pada 2 MST lebih tinggi daripada tanaman kontrol,sedangkan tanaman hasil iradiasi varietas lokal asal Bantul pada 4 MST, Boyolalipada 2 MST dan 4 MST lebih rendah daripada tanaman kontrol. Padi hitam hasiliradiasi juga memiliki rata-rata batang pendek dibandingkan dengan tanamankontrol. Uji kandungan serat kasar pada beras padi hitam hasil iradiasi memilikikandungan serat kasar lebih rendah dibandingkan dengan tanaman kontrol.