Latar Belakang: Breathing circuit disposable dalam praktik anestesi berpotensi mengalami kontaminasi mikrobiologis yang dapat meningkatkan risiko infeksi nosokomial, terutama pada kondisi penggunaan berulang. Heat and Moisture Exchanger Filter (HMEF) diketahui memiliki kemampuan filtrasi tinggi, namun efektivitasnya dalam menekan pertumbuhan kuman pada berbagai titik sirkuit anestesi masih perlu dikaji lebih lanjut. Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis pengaruh penggunaan HMEF terhadap pertumbuhan angka kuman pada dua lokasi breathing circuit disposable, yaitu L-connector dan Y-piece, serta mengidentifikasi faktor risiko yang memengaruhinya. Metode: Penelitian ini merupakan studi observasional analitik dengan desain cross sectional yang dilakukan di kamar operasi RSUD Dr. Moewardi pada Februari Maret 2026. Sampel penelitian terdiri dari 40 swab dari 20 pasien yang diambil pada dua titik sirkuit setelah prosedur anestesi umum. Analisis data menggunakan uji Wilcoxon Signed Ranks Test serta analisis bivariat dan multivariat. Hasil: Terdapat perbedaan yang signifikan antara jumlah kuman pada L-connector dan Y-piece (p < 0,001), dengan rerata angka kuman pada L-connector sebesar 69,35 ± 32,86 CFU dan pada Y-piece sebesar 1,80 ± 2,28 CFU. Analisis multivariat menunjukkan bahwa jenis operasi merupakan faktor prediktor paling dominan terhadap pertumbuhan kuman (p = 0,015). Kesimpulan: Penggunaan HMEF menurunkan pertumbuhan angka kuman secara signifikan dan berperan sebagai barier protektif terhadap kontaminasi mikroorganisme pada breathing circuit disposable.