Penyakit kulit merupakan salah satu masalah kesehatan yang umum terjadi, dengan Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa sebagai dua bakteri patogen utama penyebab infeksi kulit. Kemampuan kedua bakteri tersebut membentuk biofilm menyebabkan peningkatan resistensi terhadap antibiotik, sehingga infeksi kulit yang ditimbulkan semakin sulit diatasi. Daun turi (Sesbania grandiflora L.) mengandung berbagai senyawa metabolit sekunder yang diduga memiliki aktivitas antibiofilm. Penelitian ini bertujuan mengevaluasi aktivitas penghambatan dan degradasi biofilm ekstrak etanol daun turi terhadap S. aureus dan P. aeruginosa, serta mengidentifikasi dan menetapkan kadar kuersetin sebagai senyawa penanda (marker compound) menggunakan metode KLT-Densitometri. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan etanol 70%, dan data dianalisis menggunakan oneway ANOVA dilanjutkan uji Tukey. Hasil menunjukkan persentase hambat tertinggi pada konsentrasi 0,333 mg/mL sebesar 28,75% (S. aureus) dan 17,85% (P. aeruginosa), sedangkan degradasi tertinggi pada konsentrasi 1 mg/mL sebesar 19,93% (S. aureus) dan 9,03% (P. aeruginosa). Uji ANOVA menunjukkan pengaruh signifikan pada seluruh pengujian (p<0,0001), dengan aktivitas antibiofilm meningkat seiring peningkatan konsentrasi. Analisis KLT-Densitometri menunjukkan nilai Rf sampel (0,57–0,58) mendekati standar kuersetin, dengan kadar kuersetin sebesar 1,44%. Hasil ini membuktikan bahwa ekstrak etanol daun turi diduga memiliki aktivitas antibiofilm signifikan terhadap S. aureus dan P. aeruginosa, dengan kuersetin diduga berperan sebagai salah satu senyawa aktif yang berkontribusi terhadap aktivitas tersebut.