Infeksi bakteri yang melibatkan pembentukan biofilm merupakan salah satu penyebab menurunnya efektivitas terapi antibakteri dan meningkatnya resistensi antibiotik, termasuk pada Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Daun ketapang (Terminalia catappa L.) diketahui mengandung senyawa flavonoid, di antaranya kuersetin, yang berpotensi sebagai agen antibiofilm. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan konsentrasi ekstrak etanol daun ketapang yang memberikan aktivitas antibiofilm tertinggi terhadap E. coli dan S. aureus, serta mengidentifikasi kandungan kuersetin dalam ekstrak menggunakan metode KLT-densitometri. Ekstrak diperoleh melalui metode ultrasonic assisted extraction dengan pelarut etanol 70% (rendemen 19,97%; kadar air 4,85%). Uji antibiofilm dilakukan pada konsentrasi stok 0,4; 0,6; 0,8; dan 1,0 mg/mL dengan waktu optimum pembentukan biofilm 72 jam, dan dianalisis menggunakan One-Way ANOVA. Hasil menunjukkan aktivitas antibiofilm tertinggi yang terdapat pada konsentrasi 1,0 mg/mL dengan aktivitas penghambatan biofilm sebesar 32,219% (E. coli) dan 34,735% (S. aureus), serta degradasi biofilm sebesar 26,796% (E. coli) dan 28,735% (S. aureus). Identifikasi melalui KLT-densitometri pada panjang gelombang maksimum 298 nm menunjukkan bercak dengan nilai Rf 0,58 yang sesuai dengan senyawa standar kuersetin, dengan persamaan regresi y = 83,613x – 4605,7 (r = 0,9993) dan kadar kuersetin rata-rata 2,057% ± 0,307%. Hasil ini memberikan indikasi keberadaan kuersetin yang berpotensi sebagai senyawa antibiofilm pada ekstrak etanol daun ketapang.