Anggrek Phalaenopsis merupakan jenis anggrek terbanyak yang dijual di pasar dunia karena mempunyai keragaman yang tinggi. Disisi lain, perbanyakan anggrek secara alami menghasilkan presentase perkecambahan yang kurang sesuai dengan permintaan petani anggrek. Permasalahan tersebut dapat diatasi dengan menggunakan teknik kultur jaringan. Keberhasilan dalam penggunaan metode kultur in vitro sangat bergantung pada media yang digunakan. Tujuan penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan konsentrasi IBA dan Kinetin yang optimal serta mengetahui pengaruh interaksi antara IBA dan Kinetin untuk pertumbuhan anggrek Phalaenopsis Shu Long Beauty secara in vitro. Kegiatan penelitian dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi Tumbuhan dan Bioteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret Surakarta. Penelitian ini dilaksanakan selama 8 bulan, terhitung mulai dari bulan Oktober 2023 hingga Mei 2024. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) yang disusun secara faktorial; faktor pertama adalah konsentrasi IBA yaitu 0 ppm), A1 (0,1 ppm), A2 (0,3 ppm), A3 (0,5 ppm); faktor kedua adalah konsentrasi kinetin yaitu K0 (0 ppm), K1 (0,5 ppm), dan K2 (1 ppm), masing-masing kombinasi perlakuan dilakukan pengulangan sejumlah lima kali, kemudian dilakukan analisis ragam (anova) uji F taraf 5% dan apabila berbeda nyata dilanjutkan dengan uji DMRT dengan taraf kepercayaan 5% serta dilakukan analisis regresi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Pemberian IBA dengan konsentrasi 0,1 ppm sudah mampu meningkatkan tinggi tanaman, dan panjang daun. Pemberian IBA dengan konsentrasi 0,3 ppm mampu meningkatkan pertumbuhan lebar daun, dan pemberian IBA dengan konsentrasi 0,5 ppm mampu merangsang pembentukan akar, meningkatkan pertumbuhan jumlah akar, jumlah daun, dan jumlah tunas anggrek Phalaenopsis Shu Long Beauty. Pemberian Kinetin dengan konsentrasi 0,5 ppm sudah mampu meningkatkan pertumbuhan panjang akar, jumlah daun, lebar daun, dan bobot segar tanaman. Pemberian kinetin dengan konsentrasi 1 ppm mampu meningkatkan pertumbuhan jumlah tunas anggrek Phalaenopsis Shu Long Beauty. Perlakuan kombinasi IBA 0,5 ppm dan Kinetin 1 ppm mampu meningkatkan jumlah tunas anggrek Phalaenopsis Shu Long Beauty.