Tujuan: Mengetahui hubungan antara intensitas penerangan dengan kelelahan mata pada tenaga kerja unit laboratorium microbiologi PT. Indo Acidatama Tbk. Kemiri, Kebakkramat, Karanganyar. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian observasional dan menggunakan pendekatan cross sectional. Sampel penelitian berjumlah 30 orang dari 40 total populasi dengan kriteria inklusi yaitu usia 20-44 tahun, masa kerja lebih dari 1 tahun, tidak mengalami sakit mata, hypertensi dan diabetes mellitus, lama kerja 8 jam sehari dengan cara purposive random sampling. Uji korelasi untuk menguji hubungan antara intensitas penerangan dengan kelelahan mata menggunakan Uji korelasi Pearson Product Moment. Hasil: Tenaga kerja unit laboratorium yang mengalami kelelahan mata sebanyak 11 orang dan yang tidak mengalami kelelahan mata sebanyak 4 orang. Sementara itu yang Tenaga kerja unit laboratorium yang mengalami kelelahan mata sebanyak 5 orang dan yang tidak mengalami kelelahan mata sebanyak 10 orang. Setelah dilakukan uji statistik dengan uji korelasi Pearson Product Moment melalui program SPSS versi 16.0 diperoleh hasil r = -0,953 pada p = 0,000. Simpulan: Ada hubungan yang sangat signifikan antara intensitas penerangan dengan kelelahan mata pada tenaga kerja di unit laboratorium microbiologi PT. Indo Acidatama Tbk. Kemiri, Kebakkramat, Karanganyar dengan nilai p = 0,000 (p<0,01) yaitu setiap penurunan intensitas penerangan diikuti peningkatan kelelahan mata atau sebaliknya.