Latar Belakang: Daun Sambiloto mengandung flavonoid, beta-sitosterol, dan andrografolid yang mampu menurunkan kadar kolesterol LDL darah. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak Daun Sambiloto terhadap kadar kolesterol LDL darah tikus putih (Rattus norvegicus). Metode Penelitian: Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan the posttest only controlled group design. Tikus putih jantan galur Swiss Wistar berumur 3 bulan dengan berat badan ? 200 g diambil secara incidental sampling sebanyak 25 ekor dan dibagi dalam 5 kelompok secara random. Kelompok Kontrol Negatif (KKn) diberi aquades, sedangkan Kelompok Kontrol Positif (KKp) dan Kelompok Perlakuan 1-3 (KP1-3) diberi kuning telur (6,25 g/kg BB/hari). KP1-3 juga diberi ekstrak Daun Sambiloto dengan dosis bertingkat, yaitu 160 mg/200 g BB tikus putih, 320 mg/200 g BB tikus putih, dan 640 mg/200 g BB tikus putih. Perlakuan ini dilakukan selama 28 hari. Pengambilan data kadar kolesterol LDL darah tikus putih dilakukan 10-12 jam setelah perlakuan terakhir. Hasil yang diperoleh, kemudian dianalisis dengan uji One-Way ANOVA (a = 0.05)) yang dilanjutkan dengan Posthoc Multiple Comparisons test (LSD) (a = 0.05). Hasil Penelitian: Hasil uji One-Way ANOVA menunjukkan perbedaan yang signifikan di antara kelima kelompok penelitian p = 0.000 (p < 0.05). Hasil uji LSD menunjukkan perbedaan yang bermakna antara KKn-KKp, KKn-KP1, KKn- KP2, KKn-KP3, KKp-KP1, KKp-KP2, KKp-KP3, (p < 0.05) dan perbedaan yang tidak bermakna antara KP1-KP2-KP3 dan KP2-KP3 (p > 0.05). Simpulan Penelitian: Pemberian ekstrak Daun Sambiloto dapat menurunkan kadar kolesterol LDL darah tikus putih (Rattus norvegicus) tetapi peningkatan dosis tidak mampu meningkatkan fungsinya dalam menurunkan kadar kolesterol LDL darah. Kata kunci: ekstrak Daun Sambiloto, kolesterol LDL