Makrofauna tanah merupakan bagian dari komponen ekosistem dan memiliki peranan penting dalam perbaikan sifat fisik, kimia, dan biologi tanah. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui keanekaragaman makrofauna tanah di Taman Hutan Raya Ngargoyoso Kabupaten Karanganyar Jawa Tengah. Penelitian ini menggunakan metode survey. Teknik pengambilan data makrofauna tanah menggunakan metode hand shorting dan perangkap barber di tujuh stasiun pada ketinggian yang berbeda serta pengukuran beberapa variabel faktor lingkungan yang terkait. Dari data yang didapat kemudian dihitung nilai kepadatan relatif, indeks keanekaragaman dan dianalisis dengan ANAVA satu arah serta dilanjutkan dengan uji Duncan’s Multiple Range Test (DMRT) pada taraf 5%. Hasil penelitian ini menemukan sebanyak 2 Filum, 6 Kelas, 9 Ordo dan 24 spesies. Kedua filum tersebut adalah filum Annelida dan Arthropoda. Filum Annelida yang ditemukan hanya satu kelas, yaitu Clitella, ordo Oligochaeta, famili Lumbricidae. Filum Arthropoda ditemukan sebanyak lima kelas, yaitu: Insekta, Arachnida, Diplopoda, Chilopoda, dan Malacostraca. Indeks keanekaragaman makrofauna tanah terendah ada pada stasiun II (0,00) yang berlokasi di kawasan pemanfaatan dan tertinggi pada stasiun VII (0,75) yang berlokasi di kawasan perlindungan. Kata kunci: keanekaragaman, makrofauna tanah, Taman Hutan Raya Ngargoyoso.