Perbanyakan kultur jaringan telah dikembangkan untuk memenuhi kebutuhan anggrek, namun perlu perhatian pada tahap aklimatisasi untuk mengoptimalkan adaptasi planlet. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh jenis Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) terhadap pertumbuhan tanaman Vanda sp. Aklimatisasi var Rosetti pada fase penutup dan pot tunggal. Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret-Agustus 2022 di Jaten, Karanganyar menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 1 faktor yaitu jenis ZPT (NAA, IAA, IBA, dan GA3) konsentrasi 0,05 g.L-1 (50 ppm) juga 0 ppm . Analisis data dilakukan dengan analisis varian dan diuji lebih lanjut dengan uji kontras ortogonal 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian ZPT pada fase aklimatisasi di cover pada 10 Minggu Setelah Aklimatisasi (MSA) mampu mempertahankan persentase hidup Vanda sp. var Rosetti mencapai 100%. NAA dan IAA mampu meningkatkan jumlah daun dibandingkan IBA. Penerapan GA3 pada fase aklimatisasi pot tunggal (22 WAA) mampu mempertahankan persentase kelangsungan hidup Vanda sp. var Rosetti hingga 75%. GA3 mampu meningkatkan bobot segar dibandingkan NAA, IAA, dan IBA. NAA dan IAA memberikan hasil jumlah daun yang lebih baik dibandingkan IBA.