Gen Pituitary-Specific Transcription Factor 1 (PIT-1) diketahui merupakan salah satu gen yang mengontrol ekspresi sifat produksi susu pada sapi. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi asosiasi polimorfisme gen PIT-1 dengan sifat produksi susu sapi Friesian Holstein. Sampel beserta data recording ternak berupa data day in milk (DIM), total yield (TY), dan average yield per day (AYD) yang digunakan pada penelitian ini sebanyak 96 sampel darah diambil dari PT. Ultra Peternakan Bandung Selatan (UPBS). Penelitian ini diawali dengan ekstraksi DNA dilanjutkan dengan amplifikasi fragmen DNA gen PIT-1 dengan reaksi PCR.Genotyping dilakukan dengan mendigesti produk PCR dengan enzim retriksiEcoO109l. Analisa asosiasi SNP c.300 G>T gen PIT-1 dengan produksi susu menggunakan mix model effect dan dilanjutkan uji Tukey HSD. Amplifikasi gen PIT-1 menghasilkan produk PCR dengan ukuran 356 bp. Penelitian menunjukkan gen PIT-1 dengan SNP c.300 G>T memiliki genotipe yang bervariasi yaitu TT, TG dan GG dengan frekuensi genotipe masing-masing 0,12; 0,63; 0,25. Hasil frekuensi alel yang diperoleh untuk alel T sebanyak 0,43 dan alel G sebanyak 0,57. Hasil penelitian menunjukkan bahwa polimorfisme c.300 G>T gen PIT-1 tidak berasosiasi terhadap sifat produksi susu pada sapi FH. Berdasarkan penelitian ini maka dapat disimpulkan bahwa polimorfisme c.300 G>T gen PIT-1 tidak dapat digunakan sebagai gen kandidat untuk sifat produksi susu sapi FH.