Sistem agroforestri banyak dikembangkan di Desa Sumberejo, Batuwarno, Wonogiri sebagai strategi adaptif terhadap kondisi lahan kering, topografi tidak rata, dan kandungan batu gamping yang tinggi. Tanaman yang umum dijumpai adalah kombinasi tanaman berkayu (jati dan bambu) dengan tanaman pangan (jagung dan singkong) serta tanaman herbal (jahe). Kondisi lahan kering pada wilayah ini memengaruhi keberadaan mikroorganisme tanah, termasuk mikoriza. Mikoriza merupakan jamur fungsional yang mampu meningkatkan penyerapan air dan hara untuk tanaman. Studi ini bertujuan menganalisis kelimpahan dan spora mikoriza aktif pada berbagai tutupan lahan agroforestri (jati monokultur; agroforestri jati dan jahe; agroforestri jati, bambu, dan singkong; agroforestri jati dan jagung) serta kedalaman tanah (0-10 cm, 11-20 cm, 21-30 cm) dan mengetahui sifat kimia tanah yang berkorelasi dengan spora mikoriza. Pengambilan sampel dilakukan di 3 lokasi yang berbeda untuk setiap jenis tutupan lahan. Penelitian ini adalah penelitian survei dan sampel dianalisis di laboratorium. Data dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA, DMRT, dan uji korelasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelimpahan dan spora mikoriza aktif tertinggi terdapat pada agroforestri jati dan jagung di kedalaman 0-10 cm yaitu 137 spora/100 g tanah dengan persentase 66,67% spora aktif dan kelimpahan dan spora mikoriza aktif terendah terdapat pada agroforestri jati dan jahe di kedalaman 21-30 cm yaitu 81 spora/100 g tanah dengan persentase 16,67% spora aktif. Genus spora mikoriza yang ditemukan adalah Glomus sp. dan Acaulospora sp. Kedalaman tanah berpengaruh terhadap kelimpahan spora mikoriza. Semakin dalam tanah semakin sedikit kelimpahan dan spora mikoriza aktif. Sifat kimia tanah yang berkorelasi dengan spora mikoriza adalah pH, karbon organik, fosfor tersedia, C/P rasio, dan kalium tersedia.