Buku ilustrasi tentang resistensi antibiotik dirancang sebagai media pembelajaran untuk mahasiswa Pendidikan Biologi Universitas Sebelas Maret. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis visualisasi karya, menciptakan media pembelajaran yang sesuai kebutuhan menggunakan metode Design Based Research (DBR), dan menerapkan teori semiotika Peirce dalam perancangan. Metode DBR diterapkan melalui empat fase: analisis masalah praktis, pengembangan solusi, siklus pengujian, dan refleksi untuk menghasilkan prinsip desain. Pengumpulan data dilakukan melalui wawancara dengan ahli mikrobiologi dan mahasiswa, serta Focus Group Discussion (FGD). Analisis data menggunakan pendekatan tematik Braun & Clarke dan validasi melalui triangulasi sumber, metode, dan waktu. Hasil penelitian menunjukkan bahwa visualisasi karya dikembangkan melalui eksplorasi visual yang menghasilkan karakter bakteri dengan pendekatan kartun ilmiah, sistem warna yang terbagi menjadi warna utama (biru navy, biru muda), sekunder (merah, ungu), dan aksen (kuning), sistem tipografi menggunakan font Helvetica dan Roboto, serta sistem layout dengan Modular Grid. Perancangan menghasilkan media pembelajaran yang sesuai dengan kebutuhan mahasiswa melalui penerapan strategi visual dan konten yang sistematis. Penerapan semiotika Peirce menghasilkan sistem tanda yang efektif melalui pengembangan ikon (ilustrasi bakteri), indeks (visualisasi dampak), dan simbol (kode warna dan ikon informasi).